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本试剂盒采用Protein A琼脂糖纯化树脂，用于IgG抗体的实验室规模和工业化大规模纯化。通过C端的半胱氨酸将重组蛋白A定向偶联到基质上，增加了IgG的结合载量。整个介质的生产过程中无动物性来源的成分。


Protein A琼脂糖纯化树脂是亲和类树脂，用于纯化和分离IgG。Protein A是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc片段与哺乳动物的IgG结合，但是不与狗lgG结合，不结合人lgM、lgD和IgA。重组的Protein A包含五个高亲和力结合位点（Ka=10⁸/M）并去除了其它非主要结合域以降低非特异性结合。ProteinA琼脂糖纯化树脂是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化。目前Protein A纯化树脂已经广泛用于从生物流体和细胞培养液中分离和纯化各种类型的IgG或者IgG片段。由于Protein A和IgG的结合只有Fc片段参与，所以不影响Fab片段与抗原的结合，Protein A琼脂糖纯化树脂有较高的耐受性，可以通过免疫沉淀来分离蛋白质复合物。

• IgG结合能力高
  
• 具有比Protein G纯化树脂更温和的洗脱条件
  
• 树脂可重复使用10次，结合能力无明显损失。

Protein A琼脂糖纯化树脂 参数如下：

基质	琼脂糖微球，4%交联
平均粒径	90μm (45～165μm)
配体	在大肠杆菌中产生的重组葡萄球菌Protein A
IgG结合位点数量	5个
分子量	约34kDa
等电点	pI=5.1
含量	约5～8mg Protein A/mL
耐压	0.3 MPa,3 bar
载量	＞40mg人IgG/mL介质
保存Buffer	1×PBS（含20%乙醇）

组分	规格
1mL预装重力柱	5个
Binding/Wash Buffer	500mL
Elution Buffer	500mL

保存：2～8℃，切勿冻存


Binding/Wash Buffer：
0.15M NaCl，20mM Na2HPO4，pH7.4
Elution Buffer：
0.1M柠檬酸，pH2.5～3.0


注意：所用水在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

• 样品准备
  样品制备：上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液1:1对血清样品、腹水或细胞培养液稀释或将样品在结合/洗涤缓冲液中透析过夜。
  注意：样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
  
• 样品纯化
  预装柱可用于各种常规的中压色谱系统，这里依照?KTA仪器使用为例介绍使用方法。
  
  • 将泵管道中注满去离子水，去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。
    
  • 再折断下面的塑料封口，将预装柱接到色谱系统中并旋紧。
    
  • 用3～5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
    
  • 使用至少5倍柱床体积的结合/洗涤缓冲液平衡色谱柱，1mL预装柱推荐流速为1mL/min。
    
  • 利用泵或注射器上样。
    注意：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力，大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
    
  • 用结合/洗涤缓冲液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10～15个柱体积）。
    
  • 用洗脱缓冲液采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中通常用5倍柱体积洗脱液就足够也可以用一个小的梯度洗脱，例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
• SDS-PAGE检测
  将用纯化得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。
  
• 填料清洗
  Protein A纯化树脂可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降并严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。
  
  • 去除一些沉淀或变性物质
    用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的1X PBS,pH7.4清洗。
    
  • 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
    用3～4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton X-100清洗，然后然后立即用5倍柱体积的1XPBS,pH7.4清洗。

相关搜索：蛋白A纯化试剂盒(用于IgG纯化)，IgG亲和纯化试剂盒，IgG抗体试剂盒，Protein A琼脂糖试剂盒，Protein A Beadose Kit